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co-IP免疫共沉淀实验

来源:admin  浏览量:  更新时间:2018-07-24 15:35:17

服务概述:
        免疫共沉淀(co-IP)以抗原和抗体之间的特异反应为基础,是研究蛋白质互作的经典方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Ys也能沉淀下来。该方法常用于验证两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于筛选某一靶蛋白的新的互作搭档。  

 

二、技术优势及服务特点:
    1. 提供含有不同启动子(CMV、T7等)、不同融合标签(Flag、HA、Myc、GFP)真核表达载体表达目标蛋白

    2. 设置严格的同种属、等量IgG对照体系,保证结果的客观性、可靠性;

    3. 可根据蛋白结构,快速建立系列截短体或突变体,确定蛋白互作的关键结构域或结合位点。

 

三、服务内容及流程:

l 证两个蛋白之间的相互作用(表达丰度足够可检测内源蛋白互作)

l 确定蛋白互作的关键位点或结构域

l 筛选与目的蛋白互作的未知蛋白

四、顾客提供

1. 诱饵/目的蛋白对应的物种信息、基因编号、序列或cDNA模版。如需特殊组织、细胞、蛋白质溶液等样品,离体或裂解后迅速超低温处理、-80℃保存、干冰运输。动物组织不少于400mg;植物组织不少于2g;细胞:2x107个细胞。

2. 说明选用标签的特殊要求,一般标签抗体我方提供;特定抗体需用户提供,且能满足IPWB的要求。

 

五、报告内容及周期:

1. 相作蛋白鉴定结果,WB图片及实验报告;
   2. 质谱鉴定结果,完整的实验步骤、仪器参数、软件信息等。

    3. 实验周期:3-6


六、应用及结果示例:

 

例一:双向验证XY两个蛋白之间的相互作用


例二:根据蛋白X的结构域特征,构建全长及系列截短体(No.1-5)的表达载体,co-IP实验确定蛋白X与蛋白Y互作的关键结合区域。根据蛋白X的已知突变,构建野生型及突变体(No.6-9)的表达载体,co-IP实验确定蛋白X突变后对蛋白Y互作的影响或结合强度。



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