co-IP免疫共沉淀实验

一、服务概述：
        免疫共沉淀（co-IP）以抗原和抗体之间的特异反应为基础，是研究蛋白质互作的经典方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Ys也能沉淀下来。该方法常用于验证两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于筛选某一靶蛋白的新的互作搭档。  

二、技术优势及服务特点：
    1. 提供含有不同启动子（CMV、T7等）、不同融合标签（Flag、HA、Myc、GFP）真核表达载体表达目标蛋白；

    2. 设置严格的同种属、等量IgG对照体系，保证结果的客观性、可靠性；

    3. 可根据蛋白结构，快速建立系列截短体或突变体，确定蛋白互作的关键结构域或结合位点。

三、服务内容及流程：

l 验证两个蛋白之间的相互作用（表达丰度足够可检测内源蛋白互作）

l 确定蛋白互作的关键位点或结构域

l 筛选与目的蛋白互作的未知蛋白

四、顾客提供：

1. 诱饵/目的蛋白对应的物种信息、基因编号、序列或cDNA模版。如需特殊组织、细胞、蛋白质溶液等样品，离体或裂解后迅速超低温处理、-80℃保存、干冰运输。动物组织不少于400mg；植物组织不少于2g；细胞：2x10⁷个细胞。

2. 说明选用标签的特殊要求，一般标签抗体我方提供；特定抗体需用户提供，且能满足IP和WB的要求。

五、报告内容及周期：

1. 相作蛋白鉴定结果，WB图片及实验报告；
   2. 质谱鉴定结果，完整的实验步骤、仪器参数、软件信息等。

    3. 实验周期：3-6周

六、应用及结果示例：

例一：双向验证X和Y两个蛋白之间的相互作用

例二：根据蛋白X的结构域特征，构建全长及系列截短体（No.1-5）的表达载体，co-IP实验确定蛋白X与蛋白Y互作的关键结合区域。根据蛋白X的已知突变，构建野生型及突变体（No.6-9）的表达载体，co-IP实验确定蛋白X突变后对蛋白Y互作的影响或结合强度。

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