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平板克隆形成实验

来源:admin  浏览量:  更新时间:2020-01-16 16:24:05

细胞克隆形成率即细胞接种存活率,表示接种细胞后贴壁的细胞成活,并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活性的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

 

实验步骤:

1、取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞,并把细胞悬浮培养基中备用。

2、将细胞悬液稀释,以每孔200个细胞的密度接种于6孔板中,并轻轻转动,使细胞分散均匀。置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养。

3、待细胞贴壁后,分别加入黄连素和无糖培养基处理24h,随后更换正常培养基继续培养。

4、经常观察,当培养皿中出现肉眼可见的克隆时,终止培养。弃去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞1ml固定15分钟。然后去固定液,加适量GIMSA应用染色液染1030分钟,然后用流水缓慢洗去染色液,空气干燥

5、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片,用肉眼直接计数克隆(每个克隆含有细胞数在50个以上,大小在0.3-1.0mm之间),或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。

 

克隆形成率 =(克隆数/接种细胞数)×100%


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