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一个表达Nephrin和Podocin的条件永生化的人足细胞系

来源:admin  浏览量:  更新时间:2021-03-03 08:44:06

   细胞永生化有利于建立在体基因突变的遗传病细胞模型。2002Moin A Saleem等人发表在《美国肾脏病学会》上的一篇文章“A Conditionally Immortalized Human Podocyte Cell Line Demonstrating Nephrin and Podocin Expression”,通过向足细胞转染SV40-T基因,成功开发了有条件永生的人类足细胞细胞系。足细胞在体外允许温度(33℃)下增殖,而在转移至非允许温度(37℃)后,进入了生长停滞状态并表达不同的足细胞分化标志物。

 

培养足细胞形态及足细胞特异性标志物的表达

 

   人足细胞是位于肾小球基底膜外部的细胞,参与构成肾小球的三层滤过结构,其功能异常是引起蛋白尿疾病的重要因素。人们对于该细胞维持滤过屏障功能的特性以及功能基础尚不清楚,为了在分子水平弄清楚这一复杂细胞的功能机制,实现该细胞的体外培养显得越来越重要。

       长期以来,将从组织中分离的足细胞在标准条件下进行培养,足细胞会失去突起结构,表现为脱分化,丧失了足细胞作为滤过屏障的功能,使体外培养中足细胞的选择性分析十分困难。(图中扫描电子显微镜结果显示左图为33℃时未分化足细胞的形态,右图为37℃时分化样的足细胞)

 

 

   该研究从一位三岁孩子的肾切除标本中分离出人足细胞,随后进行细胞培养并用tsSV40表达载体转染细胞,构建足细胞细胞系。37℃诱导分化细胞,结果与体内足细胞相同,细胞形成细小突起,表达成熟足细胞特异性标志物synaptopodin,以及裂孔隔膜复合物成分P-cadherinnephrinCD2APPodocin等。

 

裂孔隔膜相关蛋白的免疫荧光、RT-PCR及Western Blot分析

 

   除此以外,免疫染色显示细胞周期蛋白的表达也与体内足细胞相一致,证实了足细胞终末分化状态。以上研究为足细胞的周期进程机制以及各种功能特性的研究提供了有用工具。

 

细胞周期相关蛋白的免疫荧光显微镜

 


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